logotype

Спектрофотометрический метод определения белков

Спектрофотометрический метод определения белков

О важности темы определения белков говорит такой факт: статья с описанием метода Лоури является самым цитируемым научным материалом в мире.

Аналитически наиболее точным способом количественного определения белка в образце материала остается разработанный еще в 1883 году сложный многоэтапный метод Кьельдаля.

В повседневной практике различных медицинских и других исследовательских лабораторий первенство принадлежит спектрофотометрическим и колориметрическим методам. Их преимуществом являются точность и чувствительность, простота и доступность.

Поглощение в ультрафиолетовой области

Одним из наиболее простых методов нахождения количества белка в пробе является спектрофотометрия раствора при установленной на приборе длине волны 280 нм.

У аминокислот из состава белка (триптофана, тирозина и фенилаланина) максимум поглощения света находится в этой части спектра, по их концентрации судят о содержании белка в пробе.

Метод Лоури и биуретов метод

Чувствительность метода Лоури позволяет обнаружить от 10 мкг/мл белка в образце. Это цветная реакция образования в щелочной среде молибденовой сини - комплекса пептидных связей с двухвалентной медью. Измерение производят при длине волны 750 нм.

Биуретов метод

Цветная реакция состоит в изменении цвета раствора, содержащего ионы меди, с нежно-голубого на фиолетовый при добавлении белка.

Биуретовый реактив (медный купорос, калий-натрий виннокислый, гидроксид натрия и иодид калия) образует с белком стойкий фиолетовый комплекс, и эта реакция мало чувствительна к посторонним влияниям. В промежутке времени от 30 до 60 минут производят измерение оптической плотности раствора в зеленой части спектра на любом спектрофотометре.

В медицинской биохимии с помощью этого метода определяют содержание общего белка в сыворотке крови (норма 60-80 г/л) и белковые фракции после электрофореза на бумаге. В электрическом поле дальше всего продвигаются альбумины, затем глобулины формируют отдельные пятна классов альфа-1, альфа-2, бета и гамма. Полоску разрезают на отдельные кусочки, содержащие эти пятна и помещают в отдельные пробирки с биуретовым реактивом для экстрагирования.

По результатам измерения оптической плотности на спектрофотометре и расчету относительно общего белка получают значение для каждой из фракций.

Спектрофотометры нового поколения В 1200 или В 1100 легко настраиваются на эти измерения и автоматически рассчитывают результат.

Цены указаны без учета НДС.НДС сверху 20%.

Идет плановое обновление корпусов!